甘薯茎尖脱毒培养技术研究

材料与方法

1.1材料

1.1.1

供试品种。鄂薯1号、51-93、1030、1027等12个甘薯品种（或品系）由湖北省农业科学院甘薯组提供；南薯88、渝薯34、万薯90等13个品种分别采自四川及湖北恩施地区。

1.1.2

主要设备。手提式不锈钢蒸汽灭菌锅、超净工作台、双目解剖镜、组织培养室、光照培养箱。

1.1.3试剂。MS 培养基、蔗糖、萘乙酸（NAA）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、 氯化汞或次氯酸钠、乙醇、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl。

1.2方法

1.2.1

样品的采集与消毒。茎尖培养前，取薯块新芽或大田生长蔓尖1～2 cm，剪去较大叶片，对芽尖进行消毒。首先用0.1%洗衣粉溶液漂洗10～15 min，倒去洗衣粉溶液，用纱布将芽尖包好，悬于水龙头下，小水冲洗20 min；再用滤纸吸干芽尖上的水分，用0.1%氯化汞（加吐温）消毒8～10 min，消毒时，不断振动容器，使氯化汞与芽尖充分接触；最后倒去氯化汞溶液，用无菌水冲洗3～4次，备用。

1.2.2

茎尖的剥离。在接种室超净工作台上，利用双目解剖镜，将已消毒好的茎尖置于载玻片上，调节升降螺丝，使茎尖清晰可见。用解剖针轻轻剥去可见叶片，仅留2个叶原基，再用解剖刀小心切下带有2个叶原基的培养用茎尖，其大小为0.37～0.49 mm。

1.2.3

茎尖生长培养基配方。以MS为基础培养基，分别添加不同浓度的蔗糖、NAA、6-BA等配制成不同培养基，接种已剥离的甘薯茎尖，置于光照培养箱中培养，保持温度25～28 ℃，光照时间12～16 h/d。在培养过程中，经常观察记载茎尖生长情况，及时剔除被污染材料，培养40 d后调查统计出苗率等各项指标。

1.2.4

生根培养基配方。以1/2MS为基础培养基，分别添加不同浓度的NAA配制成不同培养基，接种具有4～5片真叶、生长基本一致的试管苗，每处理接种10瓶，每瓶接种5株。培养30 d后，进行抽样调查分析。

1.2.5

试管苗移栽。将试管苗从培养室移至室外，移栽基质为细河沙或腐殖质土，栽后适量浇水，覆以塑料薄膜，做成拱棚形式。

1.2.6试管苗脱毒鉴定。

采用靠接法，待盆栽的甘薯试管苗植株生长至一定高度后，将盆栽的巴西牵牛和盆栽的甘薯植株各一钵移到一起，在预备接合的部位，一株向上做一切口，一株向下做一切口，然后将两切口嵌在一起，用包装带包扎。待伤口愈合后，剪去甘薯植株的下部，使其上部与巴西牵牛共生在一起，观察并记录巴西牵牛新生叶片的生长情况。

2结果与分析

2.1甘薯茎尖生长培养基配方筛选

2.1.1不同蔗糖浓度的茎尖培养效果。

以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂6.5 g/L为基础，分别添加30、40、50、60 g/L蔗糖，配制成4种培养基，在每种培养基上接种已剥离的鄂薯1号茎尖分生组织，培养40 d后进行调查，结果见表1。由表1可知，当蔗糖浓度为40 g/L时，出苗率7500%，平均苗高0.90 cm，每株叶片数3.63片，最大叶1.8 cm×1.0 cm，此4项指标均优于其他处理。当蔗糖浓度超过40 g/L时，随着蔗糖浓度的增加，各项生物指标均呈下降趋势；当蔗糖浓度达60 g/L时，出苗率46.15%，平均苗高0.36 cm，每株叶片数2.14片，明显低于其他处理，而单株鲜重达0.31 g，高于其他处理，其茎尖呈紫红色，植株皱缩矮小。

2.1.2不同NAA含量的茎尖培养效果。

以MS+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6.5 g/L为基础，分别加入005、0.10、0.15、0.20 mg/L NAA，配制成4种培养基，在每种培养基上接种51-93茎尖分生组织，培养40 d后进行调查，结果见表2。

由表2可知，当NAA浓度为0.10 mg/L时，出苗率、平均苗高和发根率均优于其他处理，幼苗生长快，叶片嫩绿，且有近50%植株长出3～5条嫩根，增加了营养吸收，促进了幼苗生长。当NAA浓度为0.20 mg/L时，出苗率只有25%，低于其他处理，大部分茎尖褐化未能成苗，已成苗的植株平均每株叶片数最高为3.50片。综合分析4个处理的各项生物指标，以NAA浓度0.10 mg/L为最佳。

2.1.3不同6-BA浓度的茎尖培养效果。

以MS+NAA 010 mg/L+蔗糖40 g/L+ 琼脂6.5 g/L为基础，分别添加010、0.25、0.50、1.00 mg/L 6-BA，配制成4种培养基，对51-93茎尖分生组织进行了接种、培养和观察，结果见表3。由表3可知，当6-BA浓度为0.50 mg/L时，其出苗率高达8889%，平均苗高1.00 cm，每株叶片数达3.00片，叶片嫩绿，幼苗生长健壮，均优于其他处理。

分析蔗糖、NAA、6-BA对甘薯茎尖培养效果的影响，获得了一种较优的茎尖生长培养基配方，即MS+ 6-BA 0.50 mg/L+ NAA 0.10 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6.5 g/L。

2.2不同甘薯品种的茎尖培养效果

采用上述优化的培养基，即MS+6-BA 0.50 mg/L+NAA 0.10 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6.5 g/L，对25个甘薯品种（或品系）茎尖进行培养，调查其出苗率，结果见表4。

由表4可知，1026、1067、3-5、胜利百号、崇阳北瓜苕5个品种茎尖培养出苗率达100.0%，南薯88、鄂薯1号、河南苕、徐薯18等11个品种茎尖培养出苗率达80.0%～909%，1027、京南瓜苕、西蒙1号等8个品种的出苗率为500%～79.3%，渝薯34出苗率最低，仅13.2%。

2.3甘薯试管苗生根培养基配方

以1/2MS为基础培养基，分别添加0.10、0.15、0.20、0.25 mg/L NAA，配制成4种培养基，接种鄂薯1号试管苗，接种的幼苗具有4～5片真叶，生长基本一致，每处理接种10瓶，每瓶接种5苗。接种后7 d幼苗基部膨大并有白色根尖突起，12 d后4种生根培养基上的幼苗全部长出嫩根。特别是当NAA浓度为020 mg/L时，幼苗生长良好，表现为苗高适度，叶片肥厚呈淡绿色，平均每株根数达8.5条，根多而粗壮。因此，1/2MS+NAA 0.20 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L可作为甘薯试管苗生根培养基。

2.4甘薯试管苗移栽

甘薯试管苗在生根培养基上培养30 d后，不需炼苗，可直接将试管苗从培养瓶中夹出，用自来水洗去根部粘附的培养基，移栽至细河沙中，用洒水壶适量浇水，再覆盖塑料薄膜，做成拱棚形式。移栽后10 d 试管苗植株长出新根，30 d后试管苗成活率达100%，植株根系发达，茎叶生长健壮。试管苗最适移栽气温为10～22 ℃。试管苗移栽后，若塑料棚内温度达30 ℃以上，须开棚通风，以降低棚内温度，避免高温灼伤植株，傍晚温度下降时，再将薄膜盖严。待试管苗完全成活，可去除塑料薄膜，使其在自然条件下生长。

44卷13期陈玉霞等甘薯茎尖脱毒培养技术研究

2.5甘薯试管苗的脱毒鉴定

巴西牵牛对多种侵染甘薯的病毒（SPFMV、SPMMV、SPLV、SPVMV、SPCLV）敏感，且受病毒侵染后，叶片上易产生系统症状，如沿叶脉网状退绿、叶面皱缩、退绿斑及花叶等。

巴西牵牛和已移栽成活的甘薯试管苗均用盆栽，待植株生长至50～70 cm，将巴西牵牛和甘薯试管苗各一钵移到一起，进行靠接，待伤口愈合后，剪去甘薯植株的下部，使其上部与巴西牵牛共生。共靠接甘薯试管苗120株，成活110株，成活率91.7%。靠接后30 d，巴西牵牛叶片表现正常的87株，脱毒率达79.1%。

3结论与讨论

该研究以MS为基础培养基，进行蔗糖、NAA、6-BA的单因素茎尖培养试验，筛选出较优的培养基，即 MS+6-BA 050 mg/L+ NAA 0.10 mg/L+蔗糖40 g/L+琼脂6.5 g/L。用上述优化的培养基对25个甘薯品种的茎尖培养出苗率进行研究，结果表明，64%品种的出苗率在80.0%以上，其中有5个品种的出苗率达1000%，32%品种的出苗率为500%～79.3%，渝薯34出苗率最低，仅为13.2%。个别品种出苗率低，可能是由该品种的遗传特性所决定，亦或还需研制新的培养基配方。试管苗生根培养基配方为1/2MS+NAA 0.20 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L，生根率达100%，幼苗根多且粗壮，茎叶生长旺盛。

以细河沙为基质移栽试管苗，并覆以塑料薄膜，幼苗成活率达100.0%。试管苗不需炼苗，可直接从培养瓶移栽至细河沙中，这与谢玲玲等[21]先将试管苗在培养瓶中炼苗2～3 d，再移栽至温室基质中炼苗10 d以上有所不同。

将已经移栽成活的甘薯试管苗进行盆栽，当茎蔓生长至50～70 cm，再与盆栽的巴西牵牛进行靠接，嫁接成活率达917%，试管苗脱毒率为79.1%。用靠接法检测甘薯茎尖分生组织试管苗的脱毒率，不仅简单易行、成本低，而且准确可靠[22]。

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