留兰香挥发油熏蒸抑菌活性研究
材料与方法
2.3留兰香挥发油对番茄灰霉病菌菌丝熏蒸作用观察
24h后观察，对照菌落正常生长，边缘菌丝较稀疏，产孢正常，量较少;显微观察菌丝粗细均匀，形态饱满，纤细直长，表面光滑（图2a）。EC90剂量处理24h后，菌落几乎没有生长，边缘菌丝致密，少有菌丝产孢;部分菌丝出现畸形，甚至扭曲、严重畸变，光学显微镜下多数菌丝出现原生质分布不均、空腔增多增大等现象，边缘和中央的菌丝均出现大量原生质泄漏，有些在菌丝顶端聚集，有些菌丝周围密布泄漏的原生质，表明整个菌丝细胞膜受损（图2b～d）。
扫描电镜观察，对照菌丝正常（图3a）。EC。。剂量处理，菌丝表面塌陷、甚至干瘪、严重扭曲皱缩，部分菌丝表面出现溶解状（图3b）。透射电镜观察，对照菌丝细胞饱满，结构清晰，细胞壁及细胞膜连续完整，细胞质均匀，空腔较少，细胞器丰富完整，细胞核、核仁等清晰可见，且核膜连续完整（图4a～b）。EC。。剂量处理后，细胞膜出现加厚、结构模糊，细胞质中空腔增大，数量增多，细胞质有消解趋势，线粒体数量增加，部分线粒体的嵴变得不明显，核仁不明显（图4c～d）。
植物挥发油组分复杂，抑菌活性由其主要成分或多种成分协同作用，不同成分的抑菌机理可能不尽相同，因此植物挥发油的抑菌机制通常是多种方式、包括作用于细胞壁、细胞膜、核酸、蛋白质等造成不可逆的损失，作用于能量系统或代谢系统诱导活性氧（ROS）积累介导细胞凋亡等。初步的研究发现经过留兰香挥发油处理，番茄灰霉病菌菌丝形态和结构遭到破坏，细胞膜通透性增加，原生质外渗，细胞质结构呈消解状，线粒体受损，表明留兰香抑菌作用位点具有多样性。多项研究表明挥发油对细胞的破坏为首先作用于细胞膜、破坏通透性，进而侵入细胞内部引起细胞器损伤，从而影响细胞的生理功能。留兰香挥发油的熏蒸抑菌作用可能也是类似的作用过程。
通过问作利用作物物种多样性，借助挥发物以诱集、驱避、化感等方式控制病虫害，可以减少化学农药的使用量，是作物绿色防控技术的一项重要方法，在害虫防治方面有较多的研究和应用。在病害防控方面，利用问作作物的挥发物，水稻与水芹问作能有效控制包括稻瘟病在内的病虫草害的发生，辣椒与韭菜的问作可以有效控制辣椒疫病的扩展与蔓延。留兰香含丰富的挥发油，奚同行和何长高的研究表明，果园套种留兰香对潜叶蛾、柑橘凤蝶和桃蚜等果树害虫有明显的生防效果，并促进果树生长、提高产量。留兰香挥发油的主要组分为抑菌活性显著的L-香芹酮、D-柠檬烯等，在本试验中留兰香挥发油对供试的4种植物病原真菌具有强烈的熏蒸活性，且留兰香易栽培种植，因此留兰香也有望用于通过与作物问作实现对作物病害的生态防控，其问作模式及作用机制有待进一步研究。
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