酶试剂法快速检测常用农药残留的比较研究

摘要：根据果蔬中农药残留检出的实际情况，采用市场上的3个商品化农残酶速测试剂盒对常见农药（水胺硫磷、敌敌畏、呋喃丹、毒死蜱、三唑磷、灭多威、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清、腐霉利和三唑酮）进行了灵敏度试验。结果表明，酶试剂对腐霉利、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清、三唑酮5种农药无抑制反应或灵敏度较差，而对其余6种农药的反应较为灵敏，其灵敏度依次为敌敌畏、呋喃丹、三唑磷、毒死蜱、水胺硫磷和灭多威。

关键词：酶抑制法；快速检测；农药；灵敏度

中图分类号：O657.32；Q556+.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4873-03

Comparative Study on Enzyme Reagent Method for Rapid Detection of Common

Pesticide Residues

YI Tao1，ZHAO Ming-ming2，LU Lei2，DING Hua2，ZHOU You-xiang2，LI Shu-qian2

（1.Department of Food Science and Technology， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China；2.Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China）

Abstract： The common residue of pesticides in fruits and vegetables， including isocarbophos， dichlorvos， carbofuran， chlorpyrifos， triazophos， methomyl， cyhalothrin， fenpropathrin， chlorothalonil， procymidone and triazolone， were analyzed by the 3 commercial enzyme inhibition kits with the pesticide residue rapid analyzer. The results showed that any enzyme reagent inhibition kit was not sensitive to procymidone， cyhalothrin， fenpropathrin， chlorothalonil and triazolone， it was only sensitive to six pesticides， the sensitivity to the six pesticides in order was dichlorvos， carbofuran， triazophos， chlorpyrifos， isocarbophos and methomyl.

Key words： enzyme inhibition method； rapid detection； pesticide； sensitivity

近年来我国农产品的农药残留状况得到了较好的控制。一是全国每年3～5次的农产品质量安全例行监测结果显示逐年好转，不仅表现在农药残留超标率逐年持续下降，已从10年前的超过50%下降到目前的10%以下，如稻米和水果检测合格率高达98%以上，蔬菜和茶叶检测合格率也达95%以上；二是农药残留水平明显降低，10年前检出超过1 mg/kg农药残留量的蔬菜数量较多，现已很少见。但另一方面，目前农药残留状况尚不稳定，仍然存在着一些风险隐患[1]。随着国内外残留限量标准的提高或监测农药种类的增加，原来不超标的农产品变成了超标[2]，特别是蔬菜检测中由过去禁用、限用农药残留超标比例大变成了现在常规农药残留超标比例提高的情况。

农产品质量安全市场准入制度已在全国各地广泛实施。在农产品批发市场、超市和农贸市场对进入市场的农产品（主要是蔬菜、水果）用农药残留快速测定技术进行监测，对不合格的农产品进行现场销毁，防止超标蔬菜、水果流入市民餐桌。本研究针对农产品中蔬菜、水果中农药残留情况以及常规农药残留速测技术，比较了3种农残速测试剂对常见农药的检测灵敏度[3]，以供相关市场准入监管部门和检测人员参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

水胺硫磷、敌敌畏等11种农药标准品购于农业部环境科研监测所，市购3种商品化酶抑制法农残快检试剂盒（分别命名为LJ、LZ和TT），其中LJ试剂盒中的酶试剂为乙酰胆碱酯酶，LZ和TT试剂盒的酶试剂为丁酰胆碱酯酶，8通道农残速测仪（HW-PR1008，海维（武汉）生物电子有限公司生产）。

1.2 方法

1.2.1 仪器稳定性试验 称取22.6 mg重铬酸钾，加入50 μL硫酸，用去离子水定容至100 mL，农残速测仪各通道每间隔20 min同时测定重铬酸钾标准溶液在410 nm处的吸光度，计算其平均值及RSD值。

1.2.2 特异性试验 方法参照GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测》[4]和NY/T 448-2001《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法》[5]，其中丁酰胆碱酯酶试剂盒操作如下：向离心管中加入试剂盒自带缓冲液3 mL，然后加入500 μL显色剂，37 ℃水浴30 min，再加入500 μL底物，混匀后立即放入速测仪中测定3 min内的吸光度变化值ΔA0，标定酶试剂活力，稀释得到酶工作液。配制不同浓度的各种农药标准品，分别加入到含有3 mL缓冲液500 μL显色剂的反应体系中，37 ℃恒温水浴30 min，加入500 μL底物，混匀后立即放入速测仪中，3 min后测定各种农药不同浓度吸光度的变化值ΔAt，计算抑制率。

抑制率=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%

式中，ΔA0为空白对照液反应3 min吸光度的变化值；ΔAt为样品溶液反应3 min吸光度的变化值。

乙酰胆碱酯酶试剂盒操作如下：取一包缓冲盐加10 mL水溶解，向离心管中加入酶试剂自带的缓冲液2.5 mL，然后加入100 μL显色剂，37 ℃水浴15 min，加入100 μL底物，混匀后立即放入速测仪中，3 min后测定其吸光度的变化值ΔA0，标定酶试剂活力。配制不同浓度的各种农药标准品，分别加入到含有3 mL缓冲液100 μL显色剂的反应体系中，37 ℃水浴15 min，加入100 μL底物，混匀后立即放入速测仪中，3 min后测定各种农药不同浓度吸光度的变化值ΔAt，同上法计算抑制率。

以农药标准品浓度的对数值为横坐标，抑制率为纵坐标，绘制农药对酶试剂的抑制曲线。

2 结果与分析

2.1 速测仪的稳定性分析

HW-PR1008型农残速测仪的稳定性试验结果见表1。由表1可知，HW-PR1008型农残速测仪总的RSD≤2.0%，说明该仪器的稳定性、重复性等均符合要求，可以用于农药残留的快速检测。

2.2 酶试剂盒的农药抑制率试验结果

TT酶试剂盒的酶试剂为丁酰胆碱酯酶，检测时抑制率≥70%，即可判定为检出农药残留。从图1可以看出，TT的酶试剂对6种农药灵敏度依次为敌敌畏、呋喃丹、三唑磷、毒死蜱、水胺硫磷和灭多威。6种农药的检出限如表2所示。

LZ酶试剂盒的酶试剂也属丁酰胆碱酯酶。从图2可以看出，LZ酶试剂对6种农药灵敏度依次为敌敌畏、呋喃丹、三唑磷、灭多威、水胺硫磷和毒死蜱。6种农药的检出限如表3所示。

LJ酶试剂盒的酶试剂属乙酰胆碱酯酶。从图3可以看出，LJ酶试剂对6种农药灵敏度依次为敌敌畏、三唑磷、呋喃丹、毒死蜱、灭多威和水胺硫磷。6种农药的检出限如表4所示。

3 小结与讨论

综上所述，3种酶抑制农残试剂盒对腐霉利、氯氟氰菊酯、甲氰菊酯、百菌清和三唑酮等5种农药无效，均不产生抑制。酶试剂无法检出蔬菜、水果中杀菌剂农药残留如腐霉利、百菌清和三唑酮等，同样也无法检出菊酯类农药残留如甲氰菊酯、氯氟氰菊酯等；对有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的敏感性和检出限依据不同的酶试剂而有所差别，需引起市场准入检测工作中相关人员的注意。

参考文献：

[1] 温雅君，高景红，李 玲，等. 批发市场蔬菜农药残留调查及风险评估[J].安徽农业科学，2011，39（33）：20543-20545.

[2] 中华人民共和国农业部. 农业部发布农产品中的农药残留及安全问题回答[EB/OL].http：//；

通讯作者，李书谦，高级农艺师，从事食品检验研究工作，（电话）027-87389267（电子信箱）lishuqian11@126.com。

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