半枝莲提取物对胃癌细胞周期及凋亡的影响

基金支持：国家自然科学基金（搭载IL-12和反义VEGF165的腺病毒与放疗联合治疗肿瘤研，81660478 ）

作者简介：黄京华，1968-03-20，籍贯吉林省龙井市，男，朝鲜族，博士研究生，副主任医师，研究肿瘤免疫，肿瘤放射治疗方面。

通讯作者：林昌岫，1971-03-01，籍贯吉林省汪清县，男，朝鲜族，博士研究生，研究肿瘤学，炎症学，免疫学方面。

【摘 要】

目的：探讨半枝莲提取物对胃癌细胞周期及凋亡的影响。方法：采用流式细胞仪测定中药半枝莲药材中醇提物（SBE）和水提物（SBW）对人胃癌细胞株BGC823细胞周期及凋亡情况，观察半枝莲提取物对体外肿瘤细胞的抑制作用。结果：体外抑瘤实验表明，SBE和SBW的细胞凋亡率较50%乙醇明显升高，SBE和SBW的G0/G1期细胞比率较50%乙醇亦明显增多，S期、G2/M期细胞明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：半枝莲提取物SBE和SBW体外均有很强的抗肿瘤作用。

【关键词】 半枝莲；醇提取物；水提取物；抗肿瘤

【中图分类号】

R365 【文献标志码】

A 【文章编号】1005-0019（2018）21-060-02

半枝莲（Scutellaria Barbata D. Don）是唇形科植物的干燥地上部分，是传统的抗肿瘤药物，它具有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛，抗癌等功效[1]。《校正本草纲目》的记载“半枝莲开紫白色花，草紫红色，对结对叶，七八月采用”。在民间草药中，有许多品种以半莲花或“半枝”命名[2]。目前的文献研究发现半枝莲提取物具有良好的抗肿瘤活性，为了进一步了解其抗肿瘤作用，本研究通过采用流式细胞仪，研究半枝莲中的 SBE和 SBW提取物对人胃癌细胞系BGC823的增殖抑制作用，旨在为日后临床进行体内抗肿瘤活性研究提供参考依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器、药品及试剂

半枝莲购自福建中医药大学国医堂；人胃癌细胞株BGC823购自上海中科院细胞库；流式细胞仪为美国BD FACS Calibur。

1.2 方法

1.2.1 标准品的配置

SBE：取干燥的产品，在乙醇中浸泡15天，减压浓缩，无菌过滤器灭菌，浓度调节至10 mg / ml，储存于4°C；SBW：取5g干燥产品，加入100 ml蒸馏水，浸泡过夜，然后在100°C下水浴1小时。通过减压浓缩制备，通过无菌过滤器灭菌，调浓度为10mg。

1.2.2 肿瘤细胞株悬液的制备

将肿瘤细胞株在含有10～20%胎牛血清、100单位青霉素和链霉素以及0.03%谷氨酰胺的RPMI1640培养基中进行培养。将培养箱置于37℃，饱和湿度，5%CO2，每隔一天更换一次液体，并等待细胞进入对数生长期，弃去贴壁细胞上清，洗涤磷酸盐缓冲液两次，用0.25%胰蛋白酶消化细胞（通过悬浮生长的细胞收集）。用磷酸盐缓冲液冲洗两次，并用RPMI 1640完全培养基调节浓度为1×105ml的细胞悬液，以备使用。

1.2.3 流式细胞仪

试剂：PI染液为Sigma 产品。仪器：美国BD FACS Calibur流式细胞仪。①取对数生长期细胞，细胞计数，调整细胞数目为1x105个/ml，加入半枝莲提取物含药培养基共同孵育，每浓度设3个复瓶。②在培养48小时后收集细胞，PBS洗涤细胞两次，1200 r/min离心8min，弃去培养液。③300ulPBS洗涤1次。④离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定过夜。⑤离心弃去固定液，3mIPBS 重悬5min。⑥400目的筛网过滤1次，500-1000r/min离心5min，弃去PBS。⑦用1mlPI染液染色，4°C避光30min。上机检测分析细胞周期及诱导凋亡情况。

1.3 统计学处理

采用SPSS 19.0 统计软件对数据进行统计分析。计量数据资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

体外抑瘤实验表明，SBE和SBW的细胞凋亡率较50%乙醇明显升高，SBE和SBW的G0/G1期细胞比率较50%乙醇亦明显增多，S期、G2/M期细胞明显减少，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

半枝莲又名并头草、狭叶韩信草，为目前国内外最热门的抗肿瘤研究中药之一。半枝莲刺激性强，其味辛、甘，性寒，具有清热解毒、活血化瘀，消肿止痛的功效，对肝癌、肺癌、直肠癌和胃癌有显著疗效[3]。然而，其活性成分和作用机制仍不清楚。

在本研究中，使用流式细胞仪，并选用人胃癌细胞系 BGC823测定了中药半枝莲SBE和SBW的抗肿瘤活性。结果显示：体外抑瘤实验表明，SBE和SBW的细胞凋亡率较50%乙醇明显升高，且相比单纯50%乙醇，SBE和SBW的G0/G1期细胞比率较50%乙醇亦明显增多，差异有统计学意义（P<0.05），S期、G2/M期细胞明显减少，提示半枝莲提取物可将肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期，由此得出延缓肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡是该提取物抗肿瘤作用机制之一。半枝莲的抗癌功效，可对急性粒细胞型白血病（ NvIL）血细胞有轻度抑制作用，有学者用细胞呼吸器法筛选实验表明[4]，发现其对急性粒细胞型白血病血细胞的抑制率大于75%。同时半枝莲能够提高免疫系统功能，但大剂量注射可抑制小鼠胸腺指数；有抑菌作用；有较强的对抗由组胺引起的平滑肌收缩作用；有很好的解痉祛痰作用。同时具有利尿、兴奋呼吸及解蛇毒的作用[5]。

综上所述，SBW和SBE在体外具有较强的抗肿瘤作用，而作为抗肿瘤药物的半枝莲需要进一步开发，其作用机制尚需进一步研究。

參考文献

[1] 汪维佳，李照，华育晖等.半枝莲不同极性提取物对人胚肾细胞体外活性的影响[J].实用肿瘤杂志，2016，31（3）：228-231.

[2] 石锐，郭素青，刘珊等.半枝莲对白血病K562细胞VEGF表达的影响[J].中国实验血液学杂志，2016，24（5）：1339-1342.

[3] 周凌凌，胡筱希，丁霞等.半枝莲提取物抗乙肝病毒体外实验研究[J].中药材，2015，38（5）：1042-1045.

[4] 梁彩霞，曹英夕，张东等.半枝莲中1个新克罗烷二萜化合物[J].中草药，2015，46（19）：2843-2845.

[5] 梁晨，杨国春，李丹慧等.半枝莲化学成分研究[J].中草药，2016，47（24）：4322-4325.

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